技術交流

2016-06-01

臨床生化檢驗中常見問答

一. 問題:溶血標本對哪些結果有影響?

答:溶血干擾的機理有三種:

(1)血細胞內高濃度物質逸出,使血清(漿)分析物濃度增加。不難理解如果血細胞中某一分析物濃度大大高于血清,則溶血無疑會導致血清中該成分濃度的增高。

(2)Hb對分光光度法測定中吸光度的干擾。溶血能引起可見光譜的短波長段(300-500nm)的吸光度明顯增加,而影響測定結果。

(3)某些細胞成分對化學反應的干擾。如血清CK動力學法測定中因RBC來源的腺苷酸激酶(AK)參與其指示反應而使CK結果假性增高,血紅蛋白可與雙縮脲試劑反應, 其反應復合物可使540nm 的吸光度增加,從而使結果偏高。溶血可使血清中LDH、CK、ALT等酶隨溶血加重而升高;使ALP、r-GT的活性隨溶血加重而降低,但機理尚不清楚。溶血對酶以外的生化指標,除K+、BIL最受干擾外,對TP、Aib、Ca2+、Na+、Cl-、Fe2+、Pi3+、TC、TG、HDL-c、Cr、BuN、GLU、UA等無明顯影響。

二.問題:導致ALT 結果為0 或負值原因有哪些?

答: 試劑失效、光源燈老化、樣品針堵塞、試劑未加入或加入量異常。

三.問題:日立7060定標 S1 ABS?報警什么意思?

答:校準得到的試劑空白值超出了設置的試劑空白吸光度范圍;

四.問題:目前國內膽紅素在臨床檢驗中主要存在哪些問題?
答:主要有三個方面的問題:
臨床檢驗結果之間的可比性較差:

1.同樣一個檢測樣品,各廠家生產的試劑盒其檢驗結果往往相差很大,但并不能因此判斷出試劑盒的好壞。

2.正常水平的膽紅素含量比較低,使得檢測方法的靈敏度和檢測儀器的精密度成為影響檢測結果的重要因素之一。

3.氧化法測定膽紅素過程中對pH值的要求很嚴格,外來影響導致pH值的變化對檢測結果產生很大的影響。

五.問題:為什么膽紅素臨床檢驗結果之間的可比性較差?
答:主要存在兩方面的問題:
標準品問題:膽紅素本身不穩定,不易保存,特別是直接膽紅素制備困難;由于國內目前沒有統一的標準品供應,造成膽紅素標準品的標準化問題得不到解決;目前市場上銷售的膽紅素標準品多為各種膽紅素的混合物(或異構體),不適于作為直接膽紅素測定的標準物。直接膽紅素測定方法學上的概念模糊:一方面,近來膽紅素測定的方法主要有兩類,即重氮法和氧化法。據文獻報道,重氮法檢測了結合膽紅素(Bc)和大部分的δ膽紅素,Bc又包括mBc和dBc,而氧化法檢測了結合膽紅素(Bc),是否包括δ膽紅素還是個未知數,尚無相關數據;另一方面,直接膽紅素和結合膽紅素的概念模糊,導致有人認為直接膽紅素就是結合膽紅素,也有人認為酶氧化法測定的結果是結合膽紅素,而化學氧化法測定的結果是直接膽紅素。由于上述的概念模糊,造成臨床上對檢測結果的解釋發生問題。

六. 問題:在氧化法檢測膽紅素的過程中,如何減少pH值的影響?
答:加倍注意儀器的清洗,對于某些儀器一定要清洗干凈,膽紅素的檢測要避開強酸、強堿試劑項目,以防污染。

七.問題:為什么會出現標本結果DB比TB高?

答:可以從以下幾方面考慮:病人標本溶血;病人使用了某些藥物如多巴胺產生干擾; 含量超過線性致使結果偏差; 久未定標 。

八.問題:膽紅素對苦味酸法肌酐測定有干擾嗎?

答:有負干擾作用,原理如下:堿性苦味酸速率法測定的原理是肌酐同堿性苦味酸反應形成了一種紅色復合物,通常在510nm外根據測定時間(20~80s)內血清和標準液吸光度的增加量計算肌酐的含量。而膽紅素在510nm處也有較強光吸收,并且在氫氧化鈉的作用下,逐漸轉化為620nm處有強光吸收的膽綠素,而膽綠素在520nm處只有很弱的光吸收,這樣就掩蓋了肌酐本身的顯色反應的表現,從而使測定結果偏低,甚至出現負值。有實驗證明,氫氧化鈉對膽紅素的作用與肌酐存在與否無關;肌酐含量越低,本身的顯色反應弱,相對干擾就嚴重。血清中的游離、結合膽紅素對肌酐的動力學測定都有干擾作用。

九.問題: 試劑間化學污染有哪些原因?

答:試劑間化學污染的原因很多,常見的類型主要有以下幾種:

1. 試劑成分的直接污染:上一測定試劑中含有下一測定所需要測定的物質,直接干擾下一檢測的測定結果。如:AMY試劑中含有較高濃度的Ca2+ ;ALP(IFCC法)、CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)、CO2(PEPC法)、AMY(EPS法)、TG等試劑中含有Mg2+;GLU(氧化酶法)、TP、ACP試劑中含有較高濃度的K+;ChE、CHOL、GLU(GOD法)、UA(尿酸酶法)、LDH(IFCC法)、HBDH(DGKC法)等試劑中含有磷酸緩沖液;CHOL、TG、HDL-C試劑中含有膽酸鈉;AST(IFCC法)、ALT(IFCC法)、試劑中含喲高活性LDH;以上試劑的交叉污染就會分別對Ca2+、Mg2+、K+(紫外酶法)、P、TBA、LDH的測定結果造成干擾。

2. 試劑成分參與反映:上一個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用,因而干擾下一反應的測定結果。如:(1)鎂測定試劑的絡合劑亦能與鐵結合,影響鐵有鐵絡合劑的結合;(2)直接膽紅素(重氮法)試劑含EDTA,鎂試劑中含有EGTA,均能與Ca結合,從而影響Ca的測定;(3)以甘油作為酶保護劑的試劑,會對TG的測定帶來干擾;(4)鈣(MTB法)試劑對鉀有負干擾;(5)CHOL試劑中含有膽固醇酯酶,可水解膽固醇酯形成游離膽固醇,而引起對游離膽固醇測定的干擾。

3. 反應進程相同:上一試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾,下一項目所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果 。如:(1)當上一個反應產物為H2O2時則對以Trinders反應產生顏色的測定結果引起干擾。如UA對CHOL結果的影響;CHOL對CREA(酶法)測定結果的影響;GLU(氧化酶法)對CREA測定結果的影響。(2)CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)試劑中含GLU成分,其分析方法的原理中GLU的已糖激酶(HK)反應過程,因此可能對GLU的測定帶來干擾。

4. 影響反應條件:影響下一項目的反應條件如pH等,從而改變反應速率。如:(1)直接膽紅素(釩酸鹽氧化法)試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性,對測定結果有負干擾。(2)CREA(苦味酸速率法)反應條件為堿性,果糖胺(動力學法)反應條件為酸性,受到污染后反應速率會減慢。(3)CREA(酶法)史試劑中含有抗壞血酸氧化酶,影響了氧化還原反應的進程,會對 TBA(酶循環法)測定結果有影響。


十.問題:生化儀器常見的分析方法有哪些?分別代表什么意義?

答: 常見的分析方法有:一點終點分析法,二點終點分析法,速率法,二點速率法。
1 一點終點分析法: 該法使用校正液,其原理是經過一定反應時間后,反應達到平衡時進行的一點分析。例如:雙縮脲法測定總蛋白,溴甲酚綠法測定白蛋白均用該法。對于反應快的物質選用一點終點分析法。
2 二點終點分析法: 該法使用校正液,其原理是用二點的吸光度之差進行計算。應用該法分兩種情況:
2 .1 在單試劑分析中,測定波長同常見干擾物質的吸收光譜有重疊時(如脂血、溶血、黃疸樣品),通過選用二點終點分析法可消除樣品空白引起的干擾。例如:GOD-POD法測定血糖,其測定波長為500nm,溶血樣品中的血紅蛋白在500nm有較強吸收,其吸光度大小在整個反應過程中保持不變,用反應完成時測定點的吸光度減去剛開始反應第一點的吸光度,這樣就扣除了溶血產生的吸光度,消除了溶血對測定的干擾。
2 .2 在雙試劑分析中,選用二點終點分析法可消除內源性物質的干擾。
3. 速率法: 用于酶活力的測定。所有酶活力測定均選用速率法。其原理是根據酶所催化反應的速率來測定酶活力的大小。

4.二點速率法: 主要用于堿性苦味酸法測定肌酐。肌酐同苦味酸反應,其速率不成線性,因而不能用速率法。由于血清中的草酰乙酸能很快同苦味酸反應形成紅色化合物干擾測定,隨著反應時間的延長,血清中的維生素C、丙酮酸、蛋白質等也能同苦味酸反應形成紅色化合物干擾測定。為了消除干擾,堿性苦味酸法測定肌酐要求在30秒和90秒兩點測定,因而選用二點速率法。

十一. 問題:是否每天定標就能保證結果穩定?

答:不一定,可能您在定標時并不是每天都新溶解定標液,因為定標液復溶后有一些項目不穩定,比如: TBIL 、 DBIL (見光分解)、 GLU (細菌分解)、酶項目(冰凍后復溶降解)。

十二.問題: EDTA 血漿影響苦味酸法的肌酐嗎?

答:影響。 EDTA 抑制肌酐與苦味酸反應,使結果偏低。

十三. 問題:奧林巴斯生化儀新增一個項目,有反應曲線、因數是正確的、方法學、讀點、波長均無問題,結果是“ 0 ”,為什么?

答:在參數中 Correction Factor A 常規下是: 1.0000 ,不小心被改為了 0 。

十四. 問題:奧林巴斯生化儀給一新項目定標時,報警 ACAL incomplete ,為什么?

答:最可能的有以下幾種原因:

① 定標液的位置不正確;

② 定標液所用的樣品杯太小、太低,不能被儀器探測到(比如有些用戶用離心管);

③ 試劑量不足,試劑 I 或試劑 II 任何一瓶試劑小于 2ml (舊版)或低于報警測試數目(新版);

④ 沒有定標申請而放入空白(藍)和 / 或定標(黃)架子。

十五. 問題:奧林巴斯生化儀新上了一個實驗項目,定標不通過,報 Calibration Error ,是什么原因?

答:在定標過種中如果有任何報警,將會定標失?。?

① 在定標過程中定標液不足;

② Rate 法的項目線性不好或范圍設置不正確;

③ 試劑空白超出所設定的范圍或波長設定錯誤;

④ 在 P-B-I 定標參數中,因數范圍過窄,先報 Calibration Factor Over Range ,后報 Calibration Error 。

十六.問題: 為什么要定標?多長時間要定標一次?

答: ⑴ 定標的意義: 定標就是要找出一個參考點,就是一個 K 值(或 F 值)。它是由儀器與試劑狀態確定下來的。當我們測定一個標本時,無論您是用手工的方法或全自動生化分析儀,測出來的值只是一個吸光度,這個吸光度對我們沒有什么意義,我們要把這個吸光度轉換成一個濃度或是酶的活性。那就要乘上一個 K 值,計算并打印出來的結果對我們就有意義了。 K 值就是我們通過定標找出來的。一般上最低要求是有試劑空白與標準品。經過儀器測定出兩個吸光度:

標準濃度 - 試劑空白

A 標準 - A 試劑空白 (試劑空白通常是 0 )

標準液的濃度我們是知道的,這兩個吸光度可以由儀器測出,這樣就得出一個 K 值。無論什么樣的標本,用其吸光度乘以 K 值我們就得到了答案。因此, K 值具有非常決定性的意義,可以決定標本的準確性。

⑵ K 值的決定因素: 我們看看 K 值會受到什么影響呢?第一,標準液的濃度一定要準確(標準液最好與標本一樣是以血清為基質的)。第二,標準液的吸光度與試劑空白的吸光度一定要準確。吸光度受儀器狀況、試劑狀況的影響,如果您的儀器相當穩定,試劑是影響 K 值的一個主要因素。

⑶ 如何確定 K 值是正確的? 一般我們用質控血清來檢查,最好是兩種水平的質控來檢查,如果質控結果很好,可以說 K 值是準確的,用這個 K 值計算出來病人的結果也是準確的,所以 K 值非常關鍵。

⑷ K 值的真面目:K 值實際上代表了斜率,截距代表試劑空白,試劑空白每天都在變化,所以 K 值的穩定性決定您的儀器與試劑,如果儀器與試劑都十分穩定,那 K 值也很穩定。

⑸ 多長時間定一次標合適? 這要看您試劑的穩定性,質控結果不好,有些項目做試劑空白可以解決,有些項目要做兩點定標。

⑹ 酶的項目如何確定 K 值:一是計算出來的理論 K 值;

二是用有酶項目的定標液得出 K 值。

十七.問題:為什么有些試劑剛倒進試劑倉里的試劑瓶就不行了?

答:在確定冰箱里的試劑質量和儀器沒問題的情況下可以考慮試劑倉里的試劑瓶久未清洗的緣故,因為每次都往試劑瓶里直接加入試劑,試劑瓶里總會有沒用完的試劑殘留,久而久之殘留試劑就會影響新加入的試劑甚至造成試劑瓶里出現霉菌。

十八.問題:在全自動生化儀上雙試劑項目中為什么出現R1、R2液不能匹配的情況?

答:雙試劑項目一段時間做下來后,試劑盒中就會出現R1比R2多出很多情況,原因是加試劑時試劑針都有剩余量,而且隨加的量不同,剩余量也不同;以日立儀器為例,在日立生化儀(如7170)操作手冊上有個關于"試劑針都有剩余量,而且隨加的量不同,剩余量也不同"的表格如下(數據大該是這 樣):
試劑針吸試劑總量  31ul 64 ul 117 ul 171ul 224ul 277ul
應加試劑量 (吐出) 20ul 50 ul 100 ul 150ul 200ul 250ul
試劑針剩余量(浪費) 11ul 14 ul 17 ul  21ul  24ul  27ul
舉個例子,做AKP項目,反應試劑參數,R2為50ul,R1為200ul, R2:R1=1:4
日立生化機實際做時R2要吸掉64ul, R1吸掉224ul, R2:R1=1:3.5
這個吸樣比例與實際需要的比例(試劑盒標稱的比例)失衡!時間一久,就會造成R2用完而R1還剩余很多的情況。

臨床生化檢驗中常見問答


一、問題:溶血標本對哪些結果有影響?

答:溶血干擾的機理有三種:

(1)血細胞內高濃度物質逸出,使血清(漿)分析物濃度增加。不難理解如果血細胞中某一分析物濃度大大高于血清,則溶血無疑會導致血清中該成分濃度的增高。

(2)Hb對分光光度法測定中吸光度的干擾。溶血能引起可見光譜的短波長段(300-500nm)的吸光度明顯增加,而影響測定結果。

(3)某些細胞成分對化學反應的干擾。如血清CK動力學法測定中因RBC來源的腺苷酸激酶(AK)參與其指示反應而使CK結果假性增高,血紅蛋白可與雙縮脲試劑反應, 其反應復合物可使540nm 的吸光度增加,從而使結果偏高。溶血可使血清中LDH、CK、ALT等酶隨溶血加重而升高;使ALP、r-GT的活性隨溶血加重而降低,但機理尚不清楚。溶血對酶以外的生化指標,除K+、BIL最受干擾外,對TP、Aib、Ca2+、Na+、Cl-、Fe2+、Pi3+、TC、TG、HDL-c、Cr、BuN、GLU、UA等無明顯影響。


二、問題:導致ALT 結果為0 或負值原因有哪些?

答: 試劑失效、光源燈老化、樣品針堵塞、試劑未加入或加入量異常。


三、問題:日立7060定標 S1 ABS?報警什么意思?

答:校準得到的試劑空白值超出了設置的試劑空白吸光度范圍;


四、問題:目前國內膽紅素在臨床檢驗中主要存在哪些問題?
答:主要有三個方面的問題:
臨床檢驗結果之間的可比性較差:

1.同樣一個檢測樣品,各廠家生產的試劑盒其檢驗結果往往相差很大,但并不能因此判斷出試劑盒的好壞。

2.正常水平的膽紅素含量比較低,使得檢測方法的靈敏度和檢測儀器的精密度成為影響檢測結果的重要因素之一。

3.氧化法測定膽紅素過程中對pH值的要求很嚴格,外來影響導致pH值的變化對檢測結果產生很大的影響。


五、問題:為什么膽紅素臨床檢驗結果之間的可比性較差?
答:主要存在兩方面的問題:
標準品問題:膽紅素本身不穩定,不易保存,特別是直接膽紅素制備困難;由于國內目前沒有統一的標準品供應,造成膽紅素標準品的標準化問題得不到解決;目前市場上銷售的膽紅素標準品多為各種膽紅素的混合物(或異構體),不適于作為直接膽紅素測定的標準物。直接膽紅素測定方法學上的概念模糊:一方面,近來膽紅素測定的方法主要有兩類,即重氮法和氧化法。據文獻報道,重氮法檢測了結合膽紅素(Bc)和大部分的δ膽紅素,Bc又包括mBc和dBc,而氧化法檢測了結合膽紅素(Bc),是否包括δ膽紅素還是個未知數,尚無相關數據;另一方面,直接膽紅素和結合膽紅素的概念模糊,導致有人認為直接膽紅素就是結合膽紅素,也有人認為酶氧化法測定的結果是結合膽紅素,而化學氧化法測定的結果是直接膽紅素。由于上述的概念模糊,造成臨床上對檢測結果的解釋發生問題。


六、問題:在氧化法檢測膽紅素的過程中,如何減少pH值的影響?
答:加倍注意儀器的清洗,對于某些儀器一定要清洗干凈,膽紅素的檢測要避開強酸、強堿試劑項目,以防污染。


七、問題:為什么會出現標本結果DB比TB高?

答:可以從以下幾方面考慮:病人標本溶血;病人使用了某些藥物如多巴胺產生干擾; 含量超過線性致使結果偏差; 久未定標 。


八、問題:膽紅素對苦味酸法肌酐測定有干擾嗎?

答:有負干擾作用,原理如下:堿性苦味酸速率法測定的原理是肌酐同堿性苦味酸反應形成了一種紅色復合物,通常在510nm外根據測定時間(20~80s)內血清和標準液吸光度的增加量計算肌酐的含量。而膽紅素在510nm處也有較強光吸收,并且在氫氧化鈉的作用下,逐漸轉化為620nm處有強光吸收的膽綠素,而膽綠素在520nm處只有很弱的光吸收,這樣就掩蓋了肌酐本身的顯色反應的表現,從而使測定結果偏低,甚至出現負值。有實驗證明,氫氧化鈉對膽紅素的作用與肌酐存在與否無關;肌酐含量越低,本身的顯色反應弱,相對干擾就嚴重。血清中的游離、結合膽紅素對肌酐的動力學測定都有干擾作用。


九、問題: 試劑間化學污染有哪些原因?

答:試劑間化學污染的原因很多,常見的類型主要有以下幾種:

1. 試劑成分的直接污染:上一測定試劑中含有下一測定所需要測定的物質,直接干擾下一檢測的測定結果。如:AMY試劑中含有較高濃度的Ca2+ ;ALP(IFCC法)、CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)、CO2(PEPC法)、AMY(EPS法)、TG等試劑中含有Mg2+;GLU(氧化酶法)、TP、ACP試劑中含有較高濃度的K+;ChE、CHOL、GLU(GOD法)、UA(尿酸酶法)、LDH(IFCC法)、HBDH(DGKC法)等試劑中含有磷酸緩沖液;CHOL、TG、HDL-C試劑中含有膽酸鈉;AST(IFCC法)、ALT(IFCC法)、試劑中含喲高活性LDH;以上試劑的交叉污染就會分別對Ca2+、Mg2+、K+(紫外酶法)、P、TBA、LDH的測定結果造成干擾。

2. 試劑成分參與反映:上一個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用,因而干擾下一反應的測定結果。如:(1)鎂測定試劑的絡合劑亦能與鐵結合,影響鐵有鐵絡合劑的結合;(2)直接膽紅素(重氮法)試劑含EDTA,鎂試劑中含有EGTA,均能與Ca結合,從而影響Ca的測定;(3)以甘油作為酶保護劑的試劑,會對TG的測定帶來干擾;(4)鈣(MTB法)試劑對鉀有負干擾;(5)CHOL試劑中含有膽固醇酯酶,可水解膽固醇酯形成游離膽固醇,而引起對游離膽固醇測定的干擾。

3. 反應進程相同:上一試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾,下一項目所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果 。如:(1)當上一個反應產物為H2O2時則對以Trinders反應產生顏色的測定結果引起干擾。如UA對CHOL結果的影響;CHOL對CREA(酶法)測定結果的影響;GLU(氧化酶法)對CREA測定結果的影響。(2)CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)試劑中含GLU成分,其分析方法的原理中GLU的已糖激酶(HK)反應過程,因此可能對GLU的測定帶來干擾。

4. 影響反應條件:影響下一項目的反應條件如pH等,從而改變反應速率。如:(1)直接膽紅素(釩酸鹽氧化法)試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性,對測定結果有負干擾。(2)CREA(苦味酸速率法)反應條件為堿性,果糖胺(動力學法)反應條件為酸性,受到污染后反應速率會減慢。(3)CREA(酶法)史試劑中含有抗壞血酸氧化酶,影響了氧化還原反應的進程,會對 TBA(酶循環法)測定結果有影響。


十、問題:生化儀器常見的分析方法有哪些?分別代表什么意義?

答: 常見的分析方法有:一點終點分析法,二點終點分析法,速率法,二點速率法。
1 一點終點分析法: 該法使用校正液,其原理是經過一定反應時間后,反應達到平衡時進行的一點分析。例如:雙縮脲法測定總蛋白,溴甲酚綠法測定白蛋白均用該法。對于反應快的物質選用一點終點分析法。
2 二點終點分析法: 該法使用校正液,其原理是用二點的吸光度之差進行計算。應用該法分兩種情況:
2 .1 在單試劑分析中,測定波長同常見干擾物質的吸收光譜有重疊時(如脂血、溶血、黃疸樣品),通過選用二點終點分析法可消除樣品空白引起的干擾。例如:GOD-POD法測定血糖,其測定波長為500nm,溶血樣品中的血紅蛋白在500nm有較強吸收,其吸光度大小在整個反應過程中保持不變,用反應完成時測定點的吸光度減去剛開始反應第一點的吸光度,這樣就扣除了溶血產生的吸光度,消除了溶血對測定的干擾。
2 .2 在雙試劑分析中,選用二點終點分析法可消除內源性物質的干擾。
3. 速率法: 用于酶活力的測定。所有酶活力測定均選用速率法。其原理是根據酶所催化反應的速率來測定酶活力的大小。

4.二點速率法: 主要用于堿性苦味酸法測定肌酐。肌酐同苦味酸反應,其速率不成線性,因而不能用速率法。由于血清中的草酰乙酸能很快同苦味酸反應形成紅色化合物干擾測定,隨著反應時間的延長,血清中的維生素C、丙酮酸、蛋白質等也能同苦味酸反應形成紅色化合物干擾測定。為了消除干擾,堿性苦味酸法測定肌酐要求在30秒和90秒兩點測定,因而選用二點速率法。


十一、 問題:是否每天定標就能保證結果穩定?

答:不一定,可能您在定標時并不是每天都新溶解定標液,因為定標液復溶后有一些項目不穩定,比如: TBIL 、 DBIL (見光分解)、 GLU (細菌分解)、酶項目(冰凍后復溶降解)。


十二、問題: EDTA 血漿影響苦味酸法的肌酐嗎?

答:影響。 EDTA 抑制肌酐與苦味酸反應,使結果偏低。


十三、問題:奧林巴斯生化儀新增一個項目,有反應曲線、因數是正確的、方法學、讀點、波長均無問題,結果是“ 0 ”,為什么?

答:在參數中 Correction Factor A 常規下是: 1.0000 ,不小心被改為了 0 。


十四、問題:奧林巴斯生化儀給一新項目定標時,報警 ACAL incomplete ,為什么?

答:最可能的有以下幾種原因:

① 定標液的位置不正確;

② 定標液所用的樣品杯太小、太低,不能被儀器探測到(比如有些用戶用離心管);

③ 試劑量不足,試劑 I 或試劑 II 任何一瓶試劑小于 2ml (舊版)或低于報警測試數目(新版);

④ 沒有定標申請而放入空白(藍)和 / 或定標(黃)架子。


十五、問題:奧林巴斯生化儀新上了一個實驗項目,定標不通過,報 Calibration Error ,是什么原因?

答:在定標過種中如果有任何報警,將會定標失?。?/span>

① 在定標過程中定標液不足;

② Rate 法的項目線性不好或范圍設置不正確;

③ 試劑空白超出所設定的范圍或波長設定錯誤;

④ 在 P-B-I 定標參數中,因數范圍過窄,先報 Calibration Factor Over Range ,后報 Calibration Error 。


十六、問題: 為什么要定標?多長時間要定標一次?

答: ⑴ 定標的意義: 定標就是要找出一個參考點,就是一個 K 值(或 F 值)。它是由儀器與試劑狀態確定下來的。當我們測定一個標本時,無論您是用手工的方法或全自動生化分析儀,測出來的值只是一個吸光度,這個吸光度對我們沒有什么意義,我們要把這個吸光度轉換成一個濃度或是酶的活性。那就要乘上一個 K 值,計算并打印出來的結果對我們就有意義了。 K 值就是我們通過定標找出來的。一般上最低要求是有試劑空白與標準品。經過儀器測定出兩個吸光度:

標準濃度 - 試劑空白

A 標準 - A 試劑空白 (試劑空白通常是 0 )

標準液的濃度我們是知道的,這兩個吸光度可以由儀器測出,這樣就得出一個 K 值。無論什么樣的標本,用其吸光度乘以 K 值我們就得到了答案。因此, K 值具有非常決定性的意義,可以決定標本的準確性。

⑵ K 值的決定因素: 我們看看 K 值會受到什么影響呢?第一,標準液的濃度一定要準確(標準液最好與標本一樣是以血清為基質的)。第二,標準液的吸光度與試劑空白的吸光度一定要準確。吸光度受儀器狀況、試劑狀況的影響,如果您的儀器相當穩定,試劑是影響 K 值的一個主要因素。

⑶ 如何確定 K 值是正確的? 一般我們用質控血清來檢查,最好是兩種水平的質控來檢查,如果質控結果很好,可以說 K 值是準確的,用這個 K 值計算出來病人的結果也是準確的,所以 K 值非常關鍵。

⑷ K 值的真面目:K 值實際上代表了斜率,截距代表試劑空白,試劑空白每天都在變化,所以 K 值的穩定性決定您的儀器與試劑,如果儀器與試劑都十分穩定,那 K 值也很穩定。

⑸ 多長時間定一次標合適? 這要看您試劑的穩定性,質控結果不好,有些項目做試劑空白可以解決,有些項目要做兩點定標。

⑹ 酶的項目如何確定 K 值:一是計算出來的理論 K 值;

二是用有酶項目的定標液得出 K 值。


十七、問題:為什么有些試劑剛倒進試劑倉里的試劑瓶就不行了?

答:在確定冰箱里的試劑質量和儀器沒問題的情況下可以考慮試劑倉里的試劑瓶久未清洗的緣故,因為每次都往試劑瓶里直接加入試劑,試劑瓶里總會有沒用完的試劑殘留,久而久之殘留試劑就會影響新加入的試劑甚至造成試劑瓶里出現霉菌。


十八、問題:在全自動生化儀上雙試劑項目中為什么出現R1、R2液不能匹配的情況?

答:雙試劑項目一段時間做下來后,試劑盒中就會出現R1比R2多出很多情況,原因是加試劑時試劑針都有剩余量,而且隨加的量不同,剩余量也不同;以日立儀器為例,在日立生化儀(如7170)操作手冊上有個關于"試劑針都有剩余量,而且隨加的量不同,剩余量也不同"的表格如下(數據大該是這 樣):
試劑針吸試劑總量  31ul 64 ul 117 ul 171ul 224ul 277ul
應加試劑量 (吐出) 20ul 50 ul 100 ul 150ul 200ul 250ul
試劑針剩余量(浪費) 11ul 14 ul 17 ul  21ul  24ul  27ul
舉個例子,做AKP項目,反應試劑參數,R2為50ul,R1為200ul, R2:R1=1:4
日立生化機實際做時R2要吸掉64ul, R1吸掉224ul, R2:R1=1:3.5
這個吸樣比例與實際需要的比例(試劑盒標稱的比例)失衡!時間一久,就會造成R2用完而R1還剩余很多的情況。


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